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17ß-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 1 humaine : cristallisation et études préliminaires de complexe enzyme-EM519-NADP+

Wei Qiu
Sheng-Xiang Lin
Dao-Wei Zhu
Robert Campbell
WQ

Membre a labase

Wei Qiu

Résumé du colloque

La 17b-hydroxystéroïde déshydrogénase de type 1 humaine (17b-HSD1) joue un rôle important dans la conversion des estrogènes. Sa principale activité est de convertir l’estrone en 17b-estradiol en utilisant un cofacteur, le NAD(P)H. La molécule EM519 est le nom donné au 17a-butyl-17b-estradiol, un inhibiteur compétitif de la 17b-HSD1. Notre groupe a cristallisé le complexe ternaire 17bHSD1-NADP+-EM519 par la méthode de co-cristallisation. L’enzyme a été purifiée à l’aide d’une colonne Mono Q et à été concentrée en présence de 20% glycérol et de 0,06% b-octylglucoside. La concentration finale de l’échantillon est supérieure à 15 mg/ml. La méthode de diffusion de vapeur a été employée lors de la cristallisation. La solution de précipitant contenait 29% de polyéthylène glycol 4000, 0,16 mM de chlorure de magnésium, 15% de glycérol et 0.1M de HEPES à pH de 7.4. Après l’apparition d’un premier cristal dans la goutte de cristallisation, nous avons ajouté l’inhibiteur EM519 jusqu’à atteindre une concentration finale en solution de 150mM. Une semaine plus tard, nous avons ajouté le cofacteur NADP+ (la concentration finale est autour de 5 mM. Le cristal a continué de croître et a atteint les dimensions de 0,12mm x 0,15mm x 0,10mm. Les données de diffraction ont été recueillies sur notre appareil «R-AXIS IIc image plate area detector» à température pièce. La résolution maximale obtenue est de 2,0A. Une collection de données comprenant 18 592 réflections de diffraction uniques sur un total de 38 259 ont été mesurées à 2,1A. Les paramètres suivant ont été obtenus: «fraction de donnée théorique»=95,9%, «Rmerge»=9.7%, «mosaïcité»=0.3. Le cristal appartient au groupe spatial C2 avec les paramètres de maille suivants: a=123.81A b=45.16A c=61.44A, b=98.90°. Après un premier cycle de «raffinement», le densité électronique indiquait la présence de l’inhibiteur lié à une position similaire à celle observée pour la liaison du 17b-estradiol pour le complexe 17b-HSD1-estradiol.

Contexte

Section :
Endocrinologie
news icon Thème du colloque :
Endocrinologie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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