Colloque

Actinobacillus pleuropneumoniae : caractérisation de deux gènes superoxydes dismutases

Marie-Claude Hélie

Marc Sirois

Catherine Ouellette

Louis Verret

Maurice Boissinot

Membre a labase

Marie-Claude Hélie

Résumé du colloque

Actinobacillus pleuropneumoniae (Ap), une bactérie de la famille des Pasteurellaceae, est l'agent responsable des pneumonies causées chez le porc. Afin d'approfondir nos connaissances sur la résistance aux stress oxidatifs d'Ap, deux superoxydes dismutases (SOD) ont été étudiées. Ces enzymes protègent les cellules contre les radicaux superoxydes (O2-) qui proviennent du métabolisme aérobique et d'agents environnementaux. Du point de vue structural, on retrouve deux classes de SOD: Mn ou Fe-SOD et Cu,Zn-SOD. La première classe est très répandue chez les procaryotes et la deuxième classe n'a été caractérisée chez seulement quelques bactéries jusqu'à présent. En utilisant des amorces dégénérées basées sur des gènes bactériens connus de Mn-SODs et Cu,Zn-SOD et à l'aide de la réaction en chaîne de la polymérase (PCR), nous avons démontré qu'Ap possède les gènes codant pour ces deux enzymes. Ces deux amplicons ont été utilisés pour cribler une banque génomique d'Ap dans lambda-ZAP Express et les clones qui ont hybridés ont été séquencés. En comparant avec d'autres enzymes les cadres de lecture ouverts obtenus, nous avons trouvé des similarités de séquences avec les SODs d'Haemophilus influenzae : 84.7% pour la Mn et 90% pour la Cu,Zn respectivement. À partir d'extraits périplasmiques et totaux d'Ap, une seule bande d'activité SOD sensible au cyanure est observée sur gels de polyacrylamide colorés pour l'activité SOD. Cette sensibilité au cyanure suggère que l'on peut détecter une activité Cu,Zn-SOD chez Ap. Des essais d'induction de SODs chez Ap ont démontré que la SOD sensible au cyanure était induite par la chaleur et le paraquat. Les deux gènes SOD d'Ap ont été cloné dans un vecteur d'expression d'E. coli, pET25b et les protéines recombinantes (rMn-SOD et rCu,Zn-SOD) ont été surproduites: le poids moléculaire des sous-unités déduit à partir des séquences a été confirmé par SDS-PAGE soit 23.8 kDa pour rMn-SOD et 18.7 kDa pour rCu,Zn-SOD. L'activité de rCu,Zn-SOD cloné avec son propre peptide signal ou avec le signal pelB a été observée dans les fractions périplasmiques. Une meilleure compréhension de la physiologie d'Ap pourrait nous aider à déterminer la fonction biologique de ces gènes et leur influence potentielle sur la pathogénèse et la virulence.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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