Colloque

Activité topologique de la protéine de transition TP2

Lucie Bolduc

Guylain Boissonneault

Membre a labase

Lucie Bolduc

Résumé du colloque

L’importante transition nucléaire qui prend place lors de la spermiogenèse implique une restructuration importante de la chromatine. Ce processus s'avère comme un déterminant important de l’intégrité fonctionnelle du gamète mâle. Il est postulé que les protéines nucléaires de transition (TP) sont impliquées dans la déstabilisation des nucléosomes de la chromatine de type somatique (CS). L’apparition séquentielle des protéines de transition abondantes TP1 et TP2 au niveau de la spermatide coïncide avec l’arrêt du métabolisme de l’ADN. Nous voulons donc établir l’activité de liaison à l’ADN des TP et vérifier si elles possèdent une activité topologique susceptible de contribuer au déplacement des nucléosomes. La protéine TP2 est une protéine basique de 13 kDa comprenant deux structures en «doigts à zinc» situés dans sa partie N-terminale. Dans une étape initiale, l’ADNc de TP2 fut donc obtenu par transcription inverse de l’ARNm de testicules de souris et PCR. L’ADNc fut ensuite introduit dans le vecteur d’expression procaryote pTRCHis (InVitrogen) inductible par l’IPTG. La protéine fut produite et récupérée par extraction acide du culot bactérien. L’obtention de la protéine recombinante en quantité voulue nous permet maintenant de caractériser l’activité topologique de la protéine associée au réarrangement de la CS. Nous comptons entre autre vérifier la liaison préférentielle de TP2 à l’ADN structuré, l’introduction possible de courbures ou supertours de modalité opposée au superenroulement des nucléosomes et la capacité de la protéine recombinante à déplacer des nucléosomes assemblés in vitro. Cette démarche vient compléter des expériences en cours visant à déterminer l’influence de TP2 sur la chromatine d’un minichromosome reporteur transfecté dans des cellules eukaryotes.