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Amélioration de la qualité des cristaux de la fructose-1,6-bisphosphatase musculaire humaine

Amélie Garneau
Sheng-Xiang Lin
Dao-Wei Zhu
AG

Membre a labase

Amélie Garneau

Résumé de la communication

La fructose-1,6-bisphosphatase (Fru-1,6-P2ase, EC 3.1.3.11) catalyse l’hydrolyse du fructose-1,6-bisphosphate (F-1,6-P2) en fructose 6-phosphate (F-6-P) et phosphate inorganique (Pi). Cette enzyme joue un rôle central dans la régulation globale de la gluconéogénèse puisqu'elle constitue la dernière enzyme spécifique de cette voie métabolique. L’activité catabolique de la Fru-1,6-P2ase requiert des ions métalliques divalents tels que Mg2+, Mn2+ et Zn2+ et certains cations monovalents tels que K+, NH4+ et Tl+. La cristallisation de la fructose-1,6-biphosphatase musculaire humaine a été publiée pour la première fois en mars 2001 (Zhu, D.-W., Xu, G.-J., Rehse, P.H., Shi, R., Zhao, F.-K and Lin, S.-X. (2001) Acta Crystallogr. D57, 847-849). Ces cristaux en complexe avec l’AMP ont été obtenus dans un milieu contenant du polyéthylène glycol, du 2-propanol et du chlorure de magnésium à un pH de 7.5, en présence de l’additif méthyl-2,6-pentanediol. Ceux-ci diffractaient toutefois à 2.04 de résolution. L’objet de notre étude était alors de trouver un moyen permettant d’améliorer la qualité de diffraction de ces cristaux. Dans ce but, nous avons utilisé le milieu de cristallisation décrit précédemment et avons effectué un criblage de différents additifs en utilisant le « additive screen » de Hampton Research. Nous avons ainsi pu découvrir que l’ajout de 1,4-butanediol au milieu de cristallisation permettait la formation de cristaux pouvant diffracter jusqu’à 1.55 de résolution et que ceux-ci possédaient également de meilleures propriétés cristallographiques que ceux poussés en présence de méthyl-2,6-pentanediol.

Contexte

Section :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université Laval

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Thème du communication :

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