Colloque

Analyse des leucotriènes (LT) dans le sang après stimulation de la synthèse ex vivo

Abdulrahman Odeimat

Pierre Borgeat

Patrice E. Poubelle

Membre a labase

Abdulrahman Odeimat

Résumé du colloque

Le but de notre étude était de développer une méthode d'analyse pour évaluer la synthèse des LT et autres métabolites de l'acide arachidonique (AA) dans le sang entier "ex vivo". Nous avons analysé les niveaux de métabolites de l'AA par les plaquettes et leucocytes du sang entier (hépariné) après incubation avec un ionophore (A23187) pendant 5 min à 37°C. Le sang est centrifugé et le plasma dénaturé par l'addition de 1 volume de méthanol/acétone (1/1, v/v) contenant 25 ng de PGB2 (B2) et de 19-OH-PGB2 (standards internes) par ml de précipité est éliminé par centrifugation et le surnageant analysé directement par HPLC à détection fluorescente (GB). L'addition de méthanol/acétone avec changement de pH pour permettre l'élution sélective des peptido-LT, est détectée par spectrométrie UV à 229 et 280 nm. La méthode permet de mesurer simultanément la production de LTB4 et des métabolites 20-OH et 20-COOH-LTB4, les LTC4, D4 et E4, des dérivés hydroxy-éicosatétraénoïques (HETEs), 5-HETE, 12-HETE, de même qu'un produit de la cyclooxygénase, le 12-hydroxy-heptadécatriénoate (HHT). Une méthode méthodologique pourrait être très utile en recherche clinique pour mesurer l'activité de nouveaux agents antiinflammatoires sur la biosynthèse des eicosanoïdes.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université Laval

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