Colloque

Analyse des phénylthiocarbamoyles d'acides aminés par chromatographie liquide en phase inversée

Sylvain Lareau

Ian C.P. Smith

Thérèse Kroft

Membre a labase

Sylvain Lareau

Résumé du colloque

La chromatographie liquide en phase inversée constitue une alternative attrayante à la chromatographie par échangeur d'ions pour l'analyse des acides aminés. Par le passé, le phénylisothiocyanate a été utilisé avec succès comme réactif, et la séparation des dérivés a été optimisée pour l'analyse des 18 acides aminés normalement présents dans les hydrolysats de protéines. Nous décrivons ici les conditions utilisées pour l'analyse de 25 acides aminés naturels. La séparation est effectuée sur une colonne Resolve Radial–Pak C–18 (particules de 5 μm). Pour le gradient, le premier solvant est un tampon acétate de sodium 25 mM à pH 5.45 contenant 1.25% d'un mélange dioxane:THF (2:1). Le second solvant est composé d'acetonitrile et d'eau (60:40). L'élution se fait en augmentant la proportion du second solvant de 5 à 50% sur 20 min à un débit de 1.5 ml/min. Dans ces conditions, la séparation prend environ 25 min et le temps d'analyse entre deux injections est de 35 min. Les dérivés phénylthiocarbamoyles absorbent fortement à 254 nm, sont relativement stables, et sont obtenus également avec les amines secondaires. La limite de détection des dérivés est de l'ordre de 50 picomoles.

Contexte

Section :

Biochimie

Thème du colloque :

Biochimie

Hôte : Université de Montréal

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