Colloque

Analyse moléculaire du rôle de la poly(ADP-ribose) polymérase dans l'apoptose

Frédéric R. Sallmann

Guy G. Poirier

Membre a labase

Frédéric R. Sallmann

Résumé du colloque

La poly(ADP-ribose) polymérase (PAEP; EC 2-4-2-30) est un enzyme présent en grande quantité dans les noyaux des cellules eucaryotes. Il est constitué de 3 domaines : un domaine C-terminal responsable de son activité catalytique; un domaine N-terminal responsable de sa fixation à l'ADN et de son activation et enfin un domaine d'automodification qui relie ces deux domaines entre eux. Cet enzyme est impliqué dans différents processus cellulaires dont la réparation de l'ADN. Il reconnaît les bris de l'ADN, s'y fixe puis synthétise la poly(ADP-ribose). Ce polymère étant un anion, la PARP se détache alors de l'ADN par répulsion de charge laissant ainsi place au «réparosome». Lors de l'apoptose, la PAEP est clivée en deux fragments : un fragment de 24kDa (fragment N-terminal) et un fragment de 89 kDa (fragment C-terminal)(Y.A. Labzebnik et al., 1994, Nature : 371, 346-347). Dans cette étude nous nous intéressons uniquement au fragment apoptotique N-terminal, représentant la partie N-terminale du domaine de fixation à l'ADN. Il a déjà été montré par différents auteurs que le domaine de fixation à l'ADN est capable d'inhiber l'activité enzymatique de la PARP en allant compétitionner pour la fixation à des bris d'ADN provoqués par différents agents comme les radiations, les radicaux libres ou les agents alkylants. Cependant, le domaine de fixation n'est jamais présent sous forme libre dans la cellule. Il est donc intéressant de comparer cette inhibition de l'activité enzymatique de la PARP par un fragment «artificiel» à celle provoquée par un fragment physiologique : le fragment apoptotique N-terminal. Pour nous aider à étudier ces inhibitions, des essais in vitro de fixation de ces 2 fragments sur l'ADN, des dosages biochimiques du polymère, des études immunocytochimiques et enfin un essai de réparation de l'ADN in situ sont employés.