Colloque

Analyse par centrifugation isopycnique des RNA de leucocytes humains

E. Lalague

L.G. Charbonneau

M. Champagne

G.H. Cousineau

Membre a labase

E. Lalague

Résumé du colloque

Les leucocytes de sujets normaux ont été cytolysés dans le tampon A (tris 10-3M; MgSO4 1,5 x 10-3M, pH 8.0) en présence de protéinase K (500 µg/ml, final) et de sarkosyl NL-97 (0.1%) et centrifugé à 15,000 x g pendant 15 min., à 20°C. Le culot a été retraité de la même façon et les deux surnageants mis en commun. Le surnageant a une solution saturée de KI, contenant du bromhydrate d'éthidium (50 µg/ml final) ont été mélangés (densité de 1.62) et centrifugés à 70,000 x g, 20°C, 65 h.). Les fractions de RNA ont été dialysées, précipitées et analysées par électrophorèse sur gel de polyacrylamide. Les résultats indiquent la présence de RNA 28S, 18S et 4S. Cette méthode est rapide, facile et permet d'isoler en une seule étape RNA, ADN et protéines d'un homogénat. On peut utiliser de très faible quantité de matériel avec pratiquement un pourcentage de récupération de 100.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université du Québec à Trois-Rivières

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