Colloque

Application d'une nouvelle technique de séquençage génomique pour séquencer sans cloner

Mohamed Boutouil

Membre a labase

Mohamed Boutouil

Résumé du colloque

Les effets physiologiques de la dopamine, un neurotransmetteur, sont dûs particulièrement aux stimulations des récepteurs dopaminergiques de types D1 et D2. Bien que les séquences de ces récepteurs soient connues chez certains mammifères, elles n'ont pas été déterminées chez le lapin qui est considéré comme le modèle idéal pour certaines études de contrôle ventilatoire au cours du développement. Identifier la séquence de l'ADN des récepteurs D1 et D2 chez le lapin est nécessaire pour étudier l'expression des gènes de ces récepteurs et comprendre le rôle de la dopamine sur la ventilation. Le séquençage de ces récepteurs a été effectué par LMPCR (pour "Ligation-Mediated Polymerase Chain Reaction"). Cette technique de séquençage génomique est très sensible et permet d'amplifier par PCR des fragments d'ADN dont la séquence en 5' est inconnue. Ce qui caractérise la technique du LMPCR, c'est l'ajout d'un "linker" asymétrique double-brin à toutes les molécules d'ADN ayant une extrémité 5' franche. Ce "linker" de séquence connue permet l'amplification exponentielle des fragments par PCR. Ces produits de PCR peuvent alors être séquencés par la méthode des didéoxy dans les deux sens. L'extrémité franche est produite par l'extension d'une amorce d'ADN par une polymérase jusqu'à un site de coupure. Dans notre expérience, les amorces de départ provenaient de domaines conservés des séquences connues des récepteurs D1 et D2 du rat. Les amorces subséquentes ont pu être déduites chez le lapin suite au premier séquençage. Les coupures ont été générées par des enzymes de restriction. Nous avons cherché des sites de restriction conservés chez le lapin à partir de la séquence du rat. Lorsqu'il n'y avait pas de sites de restriction conservés chez le lapin, les coupures étaient générées par les réactions chimiques de la méthode de séquençage de Maxam et Gilbert et une amorce supplémentaire marquée devait être employée. L'approche pour le séquençage génomique par LMPCR se veut une alternative au séquençage de l'ADNc par clonage moléculaire.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

Découvrez d'autres communications scientifiques

Dans le même colloque
Du même congressiste

Titre du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Clonage et expression hétérologue de la protéase SAP2 de Candida albicans chez Saccharomyces cerevi…

Nathalie Dubois

Caractérisation génétique et moléculaire des complexes ribonucléoprotéiques Ro chez le nématode Cae…

Jean-Claude Labbé

Identification d'une sérine/thréonine kinase associée aux domaines SH3 de Nck

Louise Larose

Voir tous les contenus de ce colloque

Autres communications du même congressiste :

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Cartographie in vitro et in vivo des lésions photo-oxydatives causées à l'ADN par les radiations ul…

Mohamed Boutouil

Les gènes d'empreinte génétique parentale : Étude de la corrélation entre l'asynchronie de réplicat…

Mohamed Boutouil

Application d'une nouvelle technique de séquençage génomique pour séquencer sans cloner

Mohamed Boutouil