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Caractérisation de la 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase surproduite dans des cellules d'insectes infectées par un baculovirus recombinant

Rock Breton
Sheng-Xiang Lin
Fu Yang
Jiu-Zhen Jin
RB

Membre a labase

Rock Breton

Résumé du colloque

La 17β-hydroxystéroïde déshydrogénase (17β-HSD) est une enzyme clé de la transformation, au niveau des tissus périphériques, des précurseurs surrénaliens et des androgènes qui stimulent le cancer de la prostate. La compréhension des mécanismes de catalyse et de régulation de cette enzyme est limitée. L'étude de la 17β-HSD et ses ligands pourrait permettre la synthèse d'inhibiteurs efficaces pour la thérapie enzymatique du cancer de la prostate. Pour faciliter la purification et obtenir les quantités nécessaires pour les études structurales, nous avons surproduit la 17β-HSD en utilisant le système d'expression basé sur l'infection de cellules d'insectes (Spodoptera frugiperda) par un baculovirus portant le cDNA de la 17β-HSD d'origine humaine sous le contrôle du promoteur de la polyhédrine. Afin de s'assurer que la 17β-HSD ainsi surproduite est identique à celle d'origine du placenta humain, nous avons comparé les deux enzymes. Les cellules d'insectes sont infectées avec le baculovirus recombinant puis, soixante heures post-infection, lysées par sonication. L'activité spécifique de la 17β-HSD dans l'extrait cellulaire est de 0.2 U/mg ce qui représente un enrichissement de 20 fois par rapport aux niveaux mesurés dans le placenta humain. Cet enrichissement permet de purifier (~95%) par une seule chromatographie d'échange l'enzyme surproduite et d'obtenir 20-30 mg de 17β-HSD par litre de culture. L'enzyme ainsi purifiée possède une activité spécifique, un poids moléculaire et une structure quaternaire identiques à la 17β-HSD d'origine humaine.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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