Colloque

Caractérisation de la caséine kinase I-g2 comme étant la sérine/thréonine protéine kinase associée à Nck

Nadia Cardillo

Louise Larose

Membre a labase

Nadia Cardillo

Résumé du colloque

Dans notre laboratoire, une étude antérieure a démontré qu'une protéine kinase qui phosphoryle des résidus sérine/thréonine, coimmunoprécipite avec la protéine adaptrice Nck. Sur la base de ses caractéristiques enzymatiques et de sa reconnaissance par un anticorps spécifique, la Caséine Kinase I-g2 (CKI-g2) a été identifiée comme la sér/thr protéine kinase associée de manière constitutive à Nck. Pour appuyer cette interaction entre Nck et CKI-g2, nous avons comparé les caractéristiques enzymatiques de la CKI-g2 recombinante et de celle endogène à l'activité kinase coimmunoprécipitée avec Nck. Chez la souris, la distribution tissulaire de la CKI-g2, évaluée par analyse Northern, nous a révélé la présence ubiquitaire d'un messager unique de 2.4 kb pour la CKI-g2. Isolé d'une librairie d'ADNc préparé à partir de cerveaux d'embryons de souris, l'ADNc codant pour la CKI-g2 a été sous-cloné dans un vecteur de type pGEX et la CKI-g2 a été exprimée chez E. Coli comme une protéine de fusion (GST-CKI-g2). Une réaction kinase in vitro, nous a confirmé que la protéine recombinante GST-CKI-g2 est active. Nous avons montré que l'activité kinase de la GST-CKI-g2 est dépendante du magnésium, qu'elle présente une spécificité de substrats et qu'elle peut être spécifiquement inhibée de manière dose-dépendante, par un inhibiteur spécifique des caséine kinases de type I, le CKI-7. Contrairement à ce qui a été reporté pour les caséine kinases de type I chez les levures, la CKI-g2 recombinante ou endogène ne possède pas d'activité tyrosine kinase intrinsèque. Finalement, nous avons comparé les caractéristiques enzymatiques de la GST-CKI-g2 à celles de la CKI-g2 endogène immunoprécipitée par un anticorps spécifique, ainsi qu'à celles de l'activité kinase coimmunoprécipitée avec Nck. Dans les mêmes conditions, nous avons déterminé que ces trois sources d'activité kinase présentent des caractéristiques enzymatiques identiques telles la dépendance au magnésium et l'inhibition spécifique par le CKI-7. Ces résultats confirment la CKI-g2 comme étant la sérine/thréonine protéine kinase associée à Nck.