Colloque

Caractérisation des canaux K+ activés par Ca2+ dans les cellules endothéliales BAE

Rémy Sauvé

Hélène Klein

Line Garneau

Robert Monette

Shufen Cai

Membre a labase

Rémy Sauvé

Résumé du colloque

Les canaux K+, dont l'activité dépend de la concentration cytosolique de Ca2+ (K(Ca2+)), se divisent en trois classes distinctes selon leur conductance; les Maxi K(Ca2+) dont la conductance est >100 pS, les canaux IK(Ca2+) de conductance intermédiaire (20 pS-50pS) et les canaux de très faible conductance (<10 pS). Nos travaux en "patch-clamp" ont porté essentiellement sur la caractérisation moléculaire d'un canal IK(Ca2+) de 40 pS exprimé dans les cellules endothéliales BAE et dans les cellules HeLa. Les résultats obtenus ont permis premièrement de mettre en évidence que l'activité de ce canal était indépendante du potentiel membranaire et que la courbe courant/voltage (I/V) mesurée en milieu symétrique était caractéristique des canaux dits à rectification anormale. A partir des courbes I/V mesurées en milieux K+ + Rb+, il fut aussi possible de démontrer que ce canal pouvait contenir plusieurs ions à la fois. Contrairement au Maxi K(Ca2+), aucune inhibition ne fut observée en présence de TEA à faible concentration (1 mM) ou de ChTx (50 mM). Un effet bloquant fut toutefois mesuré en présence de d-Tubo (5 mM). L'importance des groupements sulfhydriles fut aussi étudiée via l'utilisation d'agents réducteurs comme le GSH (5 mM) et le DTT (2 mM), ou oxydants tel le DTNB (1 mM) ou le H2O2 (10 mM). Ces travaux démontrèrent qu'une réduction des groupements sulfhydriles amenait une augmentation de l'activité du canal alors qu'une oxydation de ces mêmes groupements causait une inhibition. De plus, certaines drogues d'intérêts cliniques, comme les anesthésiques volatils, sont apparues comme pouvant affecter directement le fonctionnement des IK(Ca2+) des cellules endothéliales BAE. Par exemple, une inhibition marquée fut observée en présence d'halothane (0.4 mM) et/ou d'isoflurane (0.5 mM). Finalement, nos travaux en RT-PCR et analyse "Northern blot" ont montré que le canal IK(Ca2+) des cellules HeLa et BAE possédait une séquence primaire pour la région codant pour le pore (S3- S6) identique à celle obtenue pour le Maxi K(Ca2+) hSlo (cerveau humain). Ce résultat suggère que la région N-terminale (core) du canal serait conservée pour les différents membres de la famille Slo.

Contexte

Section :

Colloque pluridisciplinaire sur les biomembranes

Thème du colloque :

Colloque pluridisciplinaire sur les biomembranes

Responsables :

Martin Zuckermann

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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