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Résumé du colloque
L'intégration de gènes d'inhibiteurs de protéases (IP) dans le génome de plantes d'intérêt agricole représente une voie prometteuse pour le contrôle des insectes. Toutefois, une telle approche nécessite une caractérisation globale et précise des protéases digestives des insectes. Dans cette étude, l'évolution de l'activité endoprotéolytique a été observée au cours du développement du doryphore de la pomme de terre. Les protéases impliquées dans le processus de digestion ont été étudiées par l'utilisation de substrats spécifiques, de sodium dodecyl sulfate, de fluorogènes, et de tests d'inhibition. Les résultats démontrent que le stade larvaire III au stade adulte. Toutefois, la température, les pH et l'activité spécifique des protéases digestives du doryphore de la pomme de terre sont similaires. La majorité des protéases digestives du doryphore de la pomme de terre sont des protéases de type cystéinique actives à pH intermédiaire. Les limites de l'activité enzymatique ont été déterminées en utilisant des inhibiteurs spécifiques. Un inhibiteur spécifique pour les protéases de type cystéinique, le E-64. Pour les trois stades, le E-64 a diminué d'au moins 10 % l'activité des protéases digestives. Les cibles moléculaires des inhibiteurs protéasiques sont aussi variables dans le développement. Des essais de transfert in vitro ont démontré que ces molécules en milieu in vitro ne restreignent pas l'activité des protéases digestives des insectes. Des travaux sont en cours afin d'étudier la corrélation entre les cibles in vitro et in vivo.
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