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Caractérisation des isoformes de FSH dans le sérum de femmes ménopausées

Carl Lessard
Ali Akoom
André Lemay
Yves Lajeunesse
CL

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Carl Lessard

Résumé du colloque

L'hypophyse contient une vingtaine isoformes de FSH ayant une glycosylation différente. Plusieurs évidences indiquent un changement dans les isoformes de FSH selon l'âge, le sexe et le milieu hormonal. Cette communication rapporte une caractérisation préliminaire de la FSH du sérum de femmes ménopausées par comparaison avec des préparations de FSH urinaire et recombinante. Le sérum de femmes ménopausées (pools de 60 ml) a été initialement extrait avec un volume d'hexane et a été chauffé à 56°C pendant 10 min pour prévenir une dégradation protéolytique. Par la suite, le sérum a été passé sur une colonne de Sepharose Concanavaline A. Les protéines ont été éluées avec un tampon seul (Pic 1), un tampon contenant 10 mM a-D-glucopyrannoside (Pic 2) et un tampon contenant 300 mM a-D-mannopyrannoside (Pic 3). La FSH a été quantifiée par ELISA. Chaque Pic a été passé sur une colonne de Sephacryl S-100, afin d'enlever les a et g globulines. Les protéines enrichis en FSH ont ensuite été séparées par chromatographie à haute pression (HPLC) sur une colonne Mono-Q en utilisant un gradient de NaCl. Les isoformes de FSH ont été analysées par électrofocalisation sur gel et identifiés après un immunobuvardage avec un anticorps anti-FSH monoclonal de souris. L'activité biologique a été mesurée par l'activation de la luciférase co-transfectée avec le récepteur recombinant de la FSH humaine dans les cellules CHO (Chinese Hamster Ovarian. Les 3-4 isoformes contenues dans le pic 2 s'averent plus acides par comparaison à 3 autres isoformes de celui du pic 3. Ces isoformes apparaissent différentes de celles contenues dans l'urine et la FSH recombinante. Par HPLC, il est possible de séparer certaines de ces isoformes. L'activité biologique de dilution du sérum total étant parallèle à celle de dose croissante de préparations urinaire et recombinante permettra de comparer les divers isoformes. Ces résultats initiaux montrent qu'il est possible de caractériser les isoformes de FSH du sérum. L'application de ces technologies devrait être utile pour préciser le rôle de la FSH dans divers changements physiologiques et pathologiques.

Contexte

Section :
Endocrinologie
news icon Thème du colloque :
Endocrinologie
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

Endocrinologie
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