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Caractérisation des sites dans la protéine ribosomique S7 impliqués dans l'interaction avec le domaine 3' majeur du RNA

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Francis Robert

Résumé de la communication

Les interactions RNA-protéines jouent un rôle crucial dans le contrôle de plusieurs phénomènes vitaux. Notre but est de caractériser la liaison entre la protéine ribosomique S7 de la petite sous-unité ribosomique d'Escherichia coli à une portion du domaine 3' majeur du RNA ribosomique 16S. Nous utilisons un plasmide, pFD3LH, à partir duquel nous pouvons produire par transcription in vitro la portion du RNA qui lie la protéine S7. Nous avons aussi cloné le gène correspondant à la protéine S7 dans un vecteur d'expression bactérien sous contrôle d'un promoteur T7. Une queue d'histidines a été introduite dans la partie N-terminale de S7 pour faciliter sa purification par chromatographie d'affinité. Dix-sept délétions et substitutions d'acides aminés ont été produites dans différentes régions de la protéine et la liaison des différents mutants de S7 au RNA a été testée par filtration sur membrane de nitrocellulose dans différentes conditions ioniques. Nos résultats démontrent l'importance des extrémités N- et C-terminales et d'un feuillet Bêta pour la liaison, et indiquent qu'il y a plusieurs sites de contact entre la protéine et le RNA impliquant principalement des liaisons hydrogène et des ponts électrostatiques. Ces multiples points de contact permettent à la protéine de moduler la conformation du RNA, en accord avec son rôle dans l'assemblage de la petite sous-unité ribosomique.

Contexte

news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire