Colloque

Caractérisation des sites de liaison de la 17β-Hydroxystéroïde déshydrogénase 1

Jiu-Zhen Jin

Sheng-Xiang Lin

Membre a labase

Jiu-Zhen Jin

Résumé du colloque

La 17b-hydroxysteroïd déshydrogenase estrogenique (17b-HSD1) est résponsable de la formation d'estradiol, l'estrogène le plus active. La technique de dialyse à l'équilibre a été utilisée pour étudier l'interaction entre la protéine et le ligand. La liaison des substrats, des cofacteurs et des inhibiteurs avec la 17b-HSD1 a été étudiée par cette technique. Les données ont été analysées par graphique de Scatchard. Les KD de NAD et de NADP étaient respectivement de 73.7 mM et de 0.4 mM. Les résultats ont montré que la 17b-HSD1 a environ 185 fois plus d'affinité pour le NADP que pour le NAD. Les KDs pour les complexes 17b-HSD1-NADP-17a-estradiol, 17b-HSD1-NADP-17a-methyl-estradiol et 17b-HSD1-NADP-estrone étaient apparemment de 0.8 mM, de 0.3 mM et de 0.2 mM. L'affinité de la 17b-HSD1-NADP n'était pas modifiée significativement en présence d'un substrat analogue. Les KDs pour l'estradiol et l'estrone étaient de 5.6 mM et de 11.1 mM respectivement. La molécule de 17b-HSD1 possède deux sites de liaison de ligands en accord avec la structure homodimère de cet enzyme. (Lin et al., 1992; Luu-The et al., 1989). Aucun site de liaison indépendant avec des affinités différentes pour le ligand n'a été observé avec les experiences ci-haut mentionné. Les données cinétiques ont confirmé les études de dialyse à l'équilibre. Les Kms de NAD et de NADP étaient de 6.3 mM et de 0.22 mM respectivement. Les Kms de l'estradiol et de l'estrone étaient de 3.5 mM et de 0.5 mM respectivement. Pendant la purification, la 17b-HSD1 a été éluée de la colonne bleu-Sepharose (chromatographie d'affinité) avec un tampon contenant du NAD 4mM ou du NADP 20 à 30 mM. L'affinité de la 17b-HSD pour le NADP est 200 fois plus élevée que pour le NAD. La différence entre les deux a été confirmée par les données de dialyse d'équilibre. Les résultats que nous avons obtenus vont contribuer à l'étude structure-fonction de la 17b-HSD1.

Contexte

Section :

Biochimie et biologie structurale

Thème du colloque :

Biochimie et biologie structurale

Responsables :

Michel Guertin

Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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