Colloque

Caractérisation du gène ampD codant pour un régulateur de l'expression de la céphalosporinase chez Pseudomonas aeruginosa PAO1

Taimour Yousef Langaee

Ann Huletsky

Membre a labase

Taimour Yousef Langaee

Résumé du colloque

Pseudomonas aeruginosa est responsable d'environ 10% de toutes les infections causées par les bacilles à gram négatif. Les ß-lactamines (pénicillines et céphalosporines) sont parmi les antibiotiques les plus utilisés dans le traitement des infections causées par ce pathogène. Cependant, on observe un phénomène de résistance de plus en plus important chez les patients traités avec les nouvelles ß-lactamines. La surproduction d'une ß-lactamase de classe C (céphalosporinase) est une des principales causes de résistance aux ß-lactamines chez P. aeruginosa. Chez les entérobactéries, le gène ampD codant pour une protéine cytosolique (AmpD), agit comme un régulateur négatif de l'expression de cette céphalosporinase. Des études ont montré que des mutations inactivant AmpD sont responsables de hauts niveaux de résistance aux ß-lactamines chez les bactéries à gram négatif. Cependant, la présence d'un gène analogue chez P. aeruginosa n'a pas encore été démontrée. Afin de mieux comprendre le mécanisme de régulation de l'expression de cette céphalosporinase chez P. aeruginosa, nous avons tenté de démontrer la présence d'un gène analogue à ampD chez cet organisme. En utilisant deux oligonucléotides dégénérés, dérivés de la séquence de régions conservées chez les protéines AmpD actuellement connues, nous avons amplifié par PCR un fragment de 400 pb. L'analyse de la séquence nucléotidique du fragment PCR obtenu a démontré des pourcentages de similarité de 57%, 55% et 51% avec les gènes ampD de Citrobacter freundii, d'Enterobacter cloacae et d'Escherichia coli respectivement. Une banque d'ADN génomique de P. aeruginosa PAO1 construite dans le phage lambda-ZAP Express a été criblée en utilisant le fragment PCR comme sonde. Le gène ampD a été localisé sur un fragment de 2.8 Kb. Afin de compléter la séquence du gène ampD, nous avons cloné le fragment de 2.8 Kb dans le vecteur pBGS19. La présence d'un gène analogue à ampD chez P. aeruginosa suggère l'existence d'un mécanisme commun de régulation de l'expression de cette céphalosporinase chez P. aeruginosa et chez les entérobactéries.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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