Communication

Caractérisation du site d'interaction de l'échangeur Na+/H+, NHE1, avec ses inhibiteurs spécifiques

David Germain

Josette Noel

Membre a labase

David Germain

Résumé de la communication

L’échangeur Na+/H+ (ou NHE) assure l’échange électroneutre et réversible d’un ion H+ contre un ion Na+. Les domaines transmembranaires (TM) 4 et 9 participent à l’interaction des NHEs avec le Na+ et les inhibiteurs de type amiloride. De plus, la mutation de l’acide aminé (a.a.) glutamate 346 en aspartate (Glu346Asp) dans le TM9 de NHE1 provoque un phénotype de haute résistance à l’inhibition ainsi qu’une affinité diminuée pour le Na+ (Noël et al, 1996). Afin de mieux comprendre la nature des interactions mises en jeu, des mutations visant à remplacer la Glu346 par des a.a. de taille (Trp, Gly, Ala), de charge (Gln, Asn, Lys) et de polarité (Ser) différentes ainsi qu’à décaler Glu346 d’une unité vers l’extrémité N- ou C-terminale, ont été entreprises. Les mutations ont été introduites par PCR, et les fragments PCR sous-clonés ont été séquençés. Après transfection des ADNc mutants dans des fibroblastes PS120 déficients en NHE, les transfectants stables ont été sélectionnés. Les profils d’inhibition à l’EIPA, au HOE694 et à la cimétidine ont été déterminés par la mesure de l’accumulation de 22Na+. L’immunobuvardage de type Western nous a permis d’observer que les NHE1 mutants étaient exprimés de façon similaire au type sauvage. L’activité intrinsèque de chaque protéine mutante est évaluée par la quantification de ce signal ramenée à l’activité de transport sans inhibition. Jusqu’à maintenant, il en ressort que les mutations "de taille" sont aussi résistants que Glu346Asp, tout comme le mutant "de charge et taille" Glu346Asn. Le mutant de charge Glu346Gln, présente quant à lui, une résistance intermédiaire au type sauvage et au Glu346Asp. La charge ainsi que la taille de l’a.a. 346 ont donc une importance dans la liaison aux inhibiteurs. Ces travaux seront poursuivis afin de recueillir de plus amples informations pour permettre, à terme, la conception d’inhibiteurs de plus en plus spécifiques aux différentes isoformes. La compréhension des échangeurs Na+/H+ est d’une grande importance étant donné leur implication dans des pathologies telles que l’hypertension et le cancer.

Contexte

Section :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Domaine de la communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Hôte : Université de Montréal

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Thème du communication :

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