Colloque

Caractérisation d'une pompe à résistance multiple (MDR) homologue au locus emrAB de E. coli chez Pseudomonas aeruginosa

Laurent Sabbagh

Guy Cardinal

Roger C. Levesque

Membre a labase

Laurent Sabbagh

Résumé du colloque

Plusieurs micro-organismes possèdent des pompes ayant une faible spécificité à un substrat. Ces organismes sont capables d’expulser des toxines ayant une conformation structurale différente. Ce type de résistance à plusieurs drogues a été nommé pompes à résistances multiples. La pompe EmrAB chez E. coli confère une résistance à des protonophores (carbonyl cyanide m-chlorophenyl hydrazone [CCCP]) et certains antibiotiques (acide nalidixique, norfloxacin et thiolactomycin). Un homologue de emrAB de E. coli a été identifié chez P. aeruginosa. Suite à un séquençage au hasard d’une banque de P. aeruginosa dans le vecteur pTZ18R, deux recombinants ayant des inserts de 1631 pbs et 1042 pbs montraient des identités de 33 % et 43 % à emrAB de E. coli, respectivement. Des amorces spécifiques au fragment montrant de l’homologie à emrAB isolé, ont été dessinées et utilisées pour cribler une banque de P. aeruginosa dans pBeloBAC11 (Bacterial Artificial Chromosome). Cette banque ayant des inserts > 80 kb a été criblée par la méthode du Pooled Cloned PCR BACs. La séquence du locus de 5.8 kb a été déterminée à partir de l’insert HindIII de 60 kb cloner dans pBeloBAC11. Un cadre de lecture ouvert montrant de l’homologie à emrB chez P. aeruginosa contient 1532 nucléotides. Son contenu en G+C est de 67 %, ce qui est typique du génome de P. aeruginosa et a une identité de 50 % avec la protéine de E. coli. De plus, un autre cadre de lecture ouvert montrant de l’homologie à emrA de E. coli chez P. aeruginosa, séquencé à partir du BAC de 60 kb, contient 1200 nucléotides et a une identité de 43 % avec la protéine de E. coli. Le fragment codant pour l’homologue de emrAB a été cloné dans un vecteur à haute copie, ce qui nous a permis de déterminer les concentrations minimales inhibitrices (CMIs) avec l’acide nalidixique, le norfloxacin, le CCCP, la tétracycline et d’autres substances. Ces études nous ont permis de comparer la fonction de emrAB de E. coli avec l’homologue de P. aeruginosa et vont éventuellement mener à mieux comprendre la résistance chez les micro-organismes à divers antibiotiques et toxines, causée par les pompes à résistances multiples.

Contexte

Section :

Biologie et génétique moléculaires

Thème du colloque :

Biologie et génétique moléculaires

Responsables :

Louis Bernatchez

Hôte : Université Laval

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