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Caractérisation et isolement des autolysines et mise en évidence de leur action dans l'autolyse des lactocoques

Etienne Dako
Ronald E. Simard
Jean-Christophe Vuillemard
ED

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Etienne Dako

Résumé du colloque

Les travaux effectués sur les protéines dans l'étude de l'autolyse de cellules bactériennes, ces dernières années, ont permis d'identifier d'autres types de protéines ou enzymes lytiques appelées autolysines impliquées dans la dégradation de l'enveloppe de la cellule qui les contient. La variabilité de ces protéines est en fonction de la spécificité de leur activité sur la structure de la macromolécule (peptidoglycane), constituant essentiel et responsable de la rigidité de l'enveloppe cellulaire. Elles interviennent dans la rupture des liaisons ß (1,4) entre une molécule de la N-acétylglucosamine et une molécule d'acide N-acétylmuramique et vice versa. Chez les lactocoques, l'existence des autolysines est une richesse inestimable dont la mise en évidence et la stimulation revêtent un caractère très important. En effet, l'un des problèmes majeurs de la lenteur de l'affinage est la disponibilité des enzymes de maturation enfermées dans les différents compartiments de la cellule bactérienne. Ainsi, l'action ou la stimulation des autolysines, sous l'effet d'un stress ou d'une variation des constituants du milieu physiologique, est responsable de l'autolyse des lactocoques. Ce qui a pour conséquence de permettre la libération précoce des enzymes de maturation. L'objectif de cette étude est de mettre au point une technique de mise en évidence des autolysines afin d'étudier les mécanismes qui contrôlent leurs activités dans l'autolyse des lactocoques. Nos résultats, contrairement aux lactobacilles qui ont une bonne sensibilité à l'autolyse dans le tampon sodium phosphate, montrent que les lactocoques notamment: Lactococcus lactis sp. (lactis ou cremoris) s'autolysent de façon significative dans le tampon citrate. Les observations en microscopie électronique des cellules lysées ont révélé une forte autolyse après 24h identique aux résultats obtenus par la mesure de la densité optique à 650 nm (40 à 80% de lyse). Pour mettre en évidence l'existence des autolysines chez ces différentes souches, nous avons étudié leur action dans un gel SDS polyacrylamide contenant, la paroi cellulaire de Micrococcus lysodeikticus ou de celle des échantillons des souches testées. Dans le cas des Lactobacillus aucune bande de l'activité autolytique n'a été observée. Cependant, Lactococcus lactis sp. cremoris ATCC 9596 (4 bandes), Lactococcus lactis sp. lactis ATCC 14871 (2 bandes) et Lactococcus lactis sp. lactis ATCC 14872 (2 bandes) ont montré une activité autolytique dont les masses moléculaires des enzymes impliquées variaient de 80 à 106 KDa.

Contexte

Section :
Nutrition et sciences alimentaires
news icon Thème du colloque :
Nutrition et sciences alimentaires
host icon Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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