Communication

Caractérisation et régulation transcriptionnelle du gène murin de Caspase-3 durant l'apoptose

Laurent Sabbagh

Rafick-Pierre Sékaly

Martin Bourbonnière

François Denis

Membre a labase

Laurent Sabbagh

Résumé de la communication

La signalisation stimulée via le récepteur des cellules T (RcT) mène à la mort cellulaire induite par l'activation (AICD) dans les hybridomes de cellules T. Ce mécanisme d'activation dépend des événements transcriptionelles de novo. Les caspases, présentes sous leurs formes inactives, sont activées par une série de cascade durant l'apoptose. Une fois que ces protéases sont activées, leur demi-vie est réduite significativement. Ceci suggère que les niveaux intracellulaires de proenzymes disparaissent rapidement. Nous suggérons que le mécanisme impliqué dans le renouvellement des niveaux intracellulaires de procaspase-3, implique l'augmentation des niveaux de mARN. Ceci serait nécessaire au maintien d'une réponse menant à l'apoptose des cellules. Très peu d'information est connue dans la littérature sur la régulation transcriptionelle de caspase-3. Plusieurs évidences montrent que l'expression de caspase-3 est régulée durant l'apoptose, comme la cascade de signalisation par l'IFN-g, l'étoposide qui endommage l'ADN et les modèles d'ischémie cérébrales. Par contre, les mécanismes impliqués dans cette régulation ne sont toujours pas connues. Des résultats préliminaires dans les hybridomes T murins KOX-14, traités avec l'anticorps anti-CD3, montrent que ces cellules s'engagent dans l'apoptose en moins de 6 heures. De plus, une augmentation du mARN de caspase-3 de 8 fois a été observée, ce qui suggère que l'expression de caspase-3 est régulée durant l'AICD. Par conséquence, la région du promoteur murin de caspase-3 a été clonée et séquencée. Une analyse de la séquence du promoteur a identifié des éléments consensus pour divers facteurs de transcriptions, comme AP-1, NF-kB et SP-1. La région du promoteur a ensuite été clonée en amont du gène rapporteur la luciferase, dans le vecteur pXP2. Des délétions unidirectionnelles ont été générées pour identifier les régions importantes impliquées dans la régulation transcriptionelle. Ces constructions ont été transfectées en transitoires dans les lignées cellulaires Jurkat E6.1et Neuro 2A. Le plasmide ayant 1382-bp du promoteur de caspase-3 a induit une activité luciferase ~3 fois plus élevée que le promoteur basal dans les cellules Jurkat E6.1 mais non pas dans les cellules Neuro 2A. Par contre, la délétion ayant 1132-bp du promoteur avait une activité luciferase ~3 fois plus basse que le promoteur basal dans les cellules Jurkat E6.1 et Neuro 2A. Ces résultats suggèrent que caspase-3 peut être régulée d'une manière spécifique dans différents tissus. Présentement, nous étudions la régulation transcriptionelle de caspase-3 durant l'apoptose suite à l'activation des cellules via le RcT pour identifier les éléments du promoteur et les cascades de signalisations responsables à l'activation transcriptionelle du gène de caspase-3.

Contexte

Section :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Domaine de la communication :

Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire

Hôte : Université de Montréal

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Thème du communication :

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