Colloque

Caractérisation moléculaire du gène ponB codant pour la protéine liant la pénicilline 1B (PBP1B) chez Pseudomonas aeruginosa PAO1

Luc Gagnon

Ann Huletsky

Membre a labase

Luc Gagnon

Résumé du colloque

Pseudomonas aeruginosa est devenue au cours des deux dernières décennies une des principales causes d'infections chez les patients immunosupprimés ou atteints de la fibrose kystique. Les antibiotiques de type ß-lactamine (pénicillines et céphalosporines) sont parmi les agents chimiothérapeutiques les plus utilisés dans le traitement de ces infections. Cependant, on observe une émergence importante d'un grand nombre de souches multirésistantes aux ß-lactamines. Les cibles létales des ß-lactamines sont les enzymes responsables de la biosynthèse de la paroi bactérienne appelées "protéines liant la pénicilline (PBPs)", principalement les PBPs de haut poids moléculaire. L'étude des relations structure-fonction des PBPs est donc une étape essentielle pour une conception plus rationnelle de nouvelles ß-lactamines plus efficaces qui permettront de combattre ce phénomène de résistance. Chez P. aeruginosa, quatre PBPs de haut poids moléculaire ont été détectées (PBP1A, PBP1B, PBP2 et PBP3). Cependant l'activité enzymatique, le mode d'action des ß-lactamines ainsi que le rôle physiologique de ces enzymes n'ont pas encore été élucidés chez cet organisme. Afin d'isoler le gène ponB codant pour la PBP1B, nous avons utilisé deux amorces dérivées de régions conservées chez les PBP1A et 1B de Escherichia coli et chez la PBP1A de P. aeruginosa, Streptococcus oralis et Streptococcus pneumoniae afin d'amplifier par PCR, un amplicon de 996pb contenant un fragment du gène ponB de P. aeruginosa. L'analyse de la séquence nucléotidique de ce fragment a révélé la présence d'un cadre de lecture ouvert codant pour un polypeptide de 331 acides aminés. L'analyse de la séquence en acides aminés de ce polypeptide a révélé la présence de trois motifs essentiels retrouvés chez les PBPs (SXXK, SXN et KT(S)G) et un pourcentage de similarité de 60% entre la séquence de ce polypeptide et la séquence de la PBP1B de E. coli. Ceci suggère que le fragment obtenu contient possiblement le gène ponB de P. aeruginosa. Cet amplicon a été utilisé afin de cribler une banque d'ADN génomique de P. aeruginosa PAO1 construite dans le phage l ZAP EXPRESS. Trois clones positifs ont été obtenus et la détermination de leur séquence nucléotidique respective va être entreprise sous peu afin d'obtenir la séquence complète du gène ponB.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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