Colloque

Cartographie de marqueurs PCR en fonction du temps de réplication

Sabine Strehl

Janine M. Lasalle

Marc Lalande

Membre a labase

Sabine Strehl

Résumé du colloque

La duplication chromosomique procède selon une séquence temporelle qui est caractérisée par des bandes de réplication. La chronologie de ces bandes a été bien étudiée par les techniques de cytogénétique, lesquelles ont permis de déterminer que la réplication des bandes R précède celle des bandes G. Afin de mieux comprendre le mécanisme moléculaire de cette segmentation chromosomique, nous avons entrepris une étude du temps de réplication de séquences d'ADN qui ont été localisées à la région de bandes chromosomiques adjacentes 13q14.3 et 13q21.1. Une technique de PCR quantitative et compétitive a été mise au point afin de localiser des marqueurs PCR soit à la bande R (13q14.3) ou la bande G (13q21.1) en fonction du temps de réplication de ces sites. Des cellules humaines en phase de croissance exponentielle sont marquées au 5-bromodeoxyuridine (BUDR) et triées en six fractions du cycle cellulaire en fonction de leurs montants d'ADN. L'ADN substitué par BUDR est purifié par immunoprécipitation à l'aide d'un anticorps anti-BUDR et chaque site est analysé par PCR compétitive en utilisant cet ADN. Cette approche expérimentale permet d'identifier la fraction qui contient le plus grand montant de produit de PCR et ainsi de déterminer le temps de réplication de chaque site. Une vingtaine de marqueurs PCR ont été localisés soit à la bande 13q14.3 ou 13q21.1 dépendant de leurs temps de réplication. Nous avons pu aussi délimiter la zone de transition entre les marqueurs localisés aux deux bandes chromosomiques. Nos études sont maintenant axées sur la caractérisation de l'ADN dans cette zone de transition.