Colloque

Clonage de protéines qui se lient à eIF-4E

Josée Dostie

Nahum Sonenberg

Membre a labase

Josée Dostie

Résumé du colloque

Chez les eucaryotes, la régulation de la traduction se fait principalement au niveau de l'initiation, soit le processus par lequel la sous-unité ribosomale 40S et l'ARNt initiateur lient l'ARNm. L'association de l'ARNm avec la sous-unité 40S est médiée par eIF-4E, une protéine qui lie le cap des ARNm. L'importance de eIF-4E a été démontrée par des expériences où la surexpression de eIF-4E mène à la transformation cellulaire alors que la diminution de son abondance résulte en un phénotype de croissance retardée. Deux protéines ayant la propriété de se lier à eIF-4E, 4E-BP1 et 4E-BP2 ont récemment été clonées. Il a été démontré que l'association de 4E-BP1 inhibe la traduction et que l'interaction est régulée par l'insuline ainsi que par certains mitogènes et facteurs de croissance. Ces protéines ont été isolées par le criblage d'une librairie par expression d'ADNc de placenta humain. Au cours de cette procédure, un clone additionnel, KS1, a été isolé. KS1 est de 1.6 Kb, et code pour une protéine de 48 Kd qui migre à un poids moléculaire apparent de 75 Kd. L'analyse par "Northern" ayant révélé deux espèces d'ARNm, nous avons poursuivi le criblage et isolé un nouveau clone de 3.5 Kb codant pour une protéine de 108 Kd. Par far-Western, une sonde eIF-4E radiomarquée reconnaît une protéine de fusion GST-KS1 exprimée dans E. coli. Par ailleurs, un anticorps contre eIF-4E co-immunoprécipite KS1 et eIF-4E traduits in vitro. En utilisant des anticorps contre KS1, nous avons détecté dans des extraits cellulaires une protéine de 160 Kd et une de 80 Kd qui se lient spécifiquement à eIF-4E par far-Western et co-IP. Nous avons donc cloné deux nouvelles protéines qui se lient à eIF-4E, un facteur d'initiation d'importance capitale dans la traduction.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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