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Clonage du gène codant pour l'endotoxine-δ de Bacillus thuringiensis var. Kurstaki contre les larves de lépidoptères (Choristoneura fumiferana Clem.)

Sylvain Rivard
Young Sup Chung
SR

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Sylvain Rivard

Résumé du colloque

Dans notre laboratoire, nous avons isolé différents types de mutants (AC85) provenant de B. thuringiensis. Nous avons constaté qu'il n'y avait pas de perte d'efficacité de la protéine cristalline (l'endotoxine-δ) pour les mutants (spo-, cryI) ex. qu'il serait préférable d'utiliser un tel mutant pour l'épandage dans nos forêts, celui-ci ne pouvant survivre, contrairement au type sauvage, donc aucun danger pour l'écologie. Nous avons par la suite extrait les plasmides de B. th. et de nos mutants purifiés sur gradient de CsCl, suivi d'une électrophorèse sur gel d'agarose et comparé les différents patrons plasmidiques avec le type sauvage. Il y a des grandes différences pour chaque phénotype. Plusieurs auteurs suggèrent que la production de l'endotoxine dépend d'un plasmide. C'est pourquoi nous avons isolé les plasmides de B. th. en faisant un gel d'agarose (LMP) puis coupé chacun d'eux avec l'enzyme de restriction Bam HI pour insérer les différents fragments dans le site Bam HI du vecteur plasmidique pAT 153 (3,6 Kbp, ampr, Tetr). Les transformations ont été effectuées avec E. coli HB101 et les recombinants ont été sélectionnés sur un milieu avec 100 µgr/ml ampicilline. Il semble que le gène codant pour l'endotoxine soit sur le plasmide AC85. Nous déterminons la carte de restriction du gène dès que les tests in vivo avec la torche des bourgeons d'insectes seront terminés.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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