Colloque

Clonage du plasmide pMG7 de Pseudomonas aeruginosa et de son système de restriction-modification chez Escherichia coli

G. Thériault

P.H. Roy

Membre a labase

G. Thériault

Résumé du colloque

Le plasmide pMG7 code, chez P. aeruginosa, pour le système Pae R7 de restriction-modification de l'ADN. Ce plasmide n'est transférable à E. coli ni par conjugaison ni par transformation et ce même en ADN plasmidique à partir de la souche de départ très faible. Nous avons cloné le fragment Bam H de pMG7 (42 kb) sur le cosmide pHC79 (6.4 kb) et introduit le plasmide recombinant chez E. coli par encapsidation in vitro. Parmi les clones obtenus, plusieurs ont démontré une restriction in vivo du phage 680. L'un de ces clones, GT 138, a démontré par la suite la modification du phage. Les extraits crus provenant de deux clones, GT 138 et GT 125, ont démontré une activité endonucléasique produisant un patron de digestion, avec 680, identique à celui obtenu avec l'enzyme Pae R7. L'utilisation du cosmide pour le clonage rendra plus facile l'obtention de fragments des plasmides de haut PM, plasmides souvent difficiles à purifier chez la souche de départ. Nous poursuivrons présentement la cartographie du cosmide recombinant afin de sous-cloner les gènes codant pour l'endonucléase de restriction et pour la méthylase.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire

Hôte : Université du Québec à Montréal

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