Colloque

Clonage et caractérisation du gène de la 5β-réductase humaine

Annie Charbonneau

Fernand Labrie

Van Luu-The

Membre a labase

Annie Charbonneau

Résumé du colloque

La 5ß-réductase est un enzyme de la famille des aldo-céto réductases qui catalyse la réduction de la double liaison 4-ene des stéroides en 5ß-dihydro stéroides. Récemment, nous avons construit le vecteur d’expression de la 5ß-réductase sous le control du promoteur CMV et transfecté dans les cellules embryonnaires de rein humain transformées. L’enzyme surexprimé catalyse efficacement la transformation de l’androstènedione, la progestérone, la testostérone, le cortisol et le corticostérone. Cet enzyme pourrait donc jouer un rôle important dans le contrôle du niveau de glucocorticoides intracellulaires, ainsi que dans la formation des étiocholanes, notamment l’étiocholanolone. Pour mieux comprendre le rôle et la régulation de l’expression de cet enzyme, nous avons entrepris le clonage du gène afin d’étudier les facteurs qui régulent son expression. Le clonage du gène de la 5ß-réductase a été réalisé par criblage d'une banque d'ADN génomique humain construite dans les phages EMBL3 avec la sonde d'ADN complémentaire de la 5ß-réductase humaine marquée radioactivement au P32. Nous avons isolé 2 gènes, le premier ne contenant pas d’intron et possédant plusieurs mutations est sans doute un pseudogène incorporé dans le génome par rétrotransposition. Sa séquence est homologue à 90% avec l'ADNc. Le deuxième gène contient 9 exons et 8 introns couvrant plus de 50 Kb. Le premier intron est particulièrement grand, couvrant à lui seul plus de 10 kb. L’élucidation du gène nécessite le recouvrement de 3 phages. L’élucidation de la structure du gène ainsi que la connaissance de la partie 5’ adjacente nous permet d’envisager l’étude moléculaire de la régulation de l’expression de ce gène.

Contexte

Section :

Endocrinologie

Thème du colloque :

Endocrinologie

Hôte : Université Laval

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