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Clonage et caractérisation d'un gène homologue à clpP d'E. coli chez Helicobacter pylori

Hossein Salimnia
Maurice Boissinot
HS

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Hossein Salimnia

Résumé du colloque

Helicobacter pylori, un bacille à gram négatif microaérophile, joue un rôle dans la pathogénèse de la gastrite et dans le développement de l'ulcère duodénal, et possiblement l'ulcère gastrique ainsi que le cancer de l'estomac. Nous avons isolé et séquencé l'homologue de clpP d'E.coli chez H.pylori. La protéase Clp (protéase Ti) est le prototype des protéases énergie-dépendantes retrouvées dans toutes les cellules, et clpP est l'une de ses deux composantes. ClpP serait une protéine de choc thermique et est une protéase à sérine unique. Des amorces dégénérées, basées sur des séquences en acides aminés conservées chez des protéines ClpP bactériennes connues, ont été utilisées pour amplifier un fragment de 330 pb du gène à partir d'un gabarit d'ADN isolé chez H. pylori (souche référence ATCC # 43504). Le fragment a été cloné dans le vecteur PGEM-T et séquencé. Il a 71% d'identité avec la séquence en acides aminés de ClpP d'E.coli. Afin de déterminer la séquence complète du gène, le produit PCR a été utilisé pour cribler une banque génomique ordonnée d'H. pylori dans le cosmide Lorist 6. Des expériences d'hybridation Southern ont démontré que clpP est situé sur le cosmide numéro 5. Le gène clpP d'H. pylori est long de 576 pb, a un contenu mole% G C de 45 et la protéine a une masse prévue de 21.2 kDa; celle-ci est 50% et 58% identique avec ClpP d'E.coli et d'Haemophilus influenzae, respectivement. En séquençant la région en amont du gène, nous avons trouvé une partie d'un cadre de lecture ouvert ayant 50% de similarité avec la partie C-terminale du facteur d'activation (trigger factor, tig) d'E.coli, ce qui suggère une organisation chromosomique conservée entre E.coli et H.pylori dans cette région. Nos résultats démontrent que ClpP d'H. pylori possède une sérine à la position 113, tout comme E. coli, dans le site actif de ClpP.

Contexte

Section :
Biologie cellulaire et moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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