Colloque

Clonage et caractérisation d'une nouvelle UDP-glucuronosyltransférase (UGT2B18) de singe active sur les 3-hydroxyandrogènes

David Turgeon

Olivier Barbier

Eric Lévesque

Dean W. Hum

Martin Beaulieu

Alain Belanger

Membre a labase

David Turgeon

Résumé du colloque

Les UDP-glucuronosyltransférases (UGTs) sont des enzymes membranaires du réticulum endoplasmique qui catalysent la conjugaison de l'acide glucuronique avec des composés exogènes (polluants environnementaux et drogues), ou endogènes (vitamines liposolubles, bilirubine ou hormones stéroïdiennes). Les produits glucuronidés sont plus polaires et donc plus facilement éliminés via la bile ou l'urine. Les études précédentes ont démontré que le singe est le meilleur modèle animal comparable à l'humain puisque ce sont les deux seules espèces présentant des niveaux élevés d'ADT-G et de 3a-diol-G circulants. Afin de démontrer l'importance physiologique des UGTs dans le maintien de l'homéostasie androgénique des tissus cibles, une banque d'ADN complémentaire (ADNc) de prostate de singe a été criblée avec des sondes d'UGTs humaines et un ADNc de 1,7 kb (UGT2B18) a été isolé. L'ADNc obtenu contient un cadre de lecture ouvert de 1583 pb codant pour une protéine de 529 résidus, identique à 96 % à celle de UGT2B9, une isoenzyme de singe active sur les stéroïdes C18, C19 et C21. L'analyse de cette séquence révèle la présence d'un signal d'insertion membranaire dans la partie amino-terminale, un domaine d'ancrage membranaire dans la partie carboxy-terminale et deux sites potentiels de N-glycosylation en position 67 et 68. Le clone UGT2B18 a été transfecté dans les cellules HK293 et une lignée cellulaire exprimant UGT2B18 a été établie. Des analyses par immunobuvardage de la lignée UGT2B18-HK293 avec un anticorps polyclonal dirigé contre les UGTs ont révélé l'expression d'une protéine de 53 kDa. L'activité transférase d'UGT2B18 a été testée sur 60 substrats et a démontré une activité sur les C19 stéroïdes possédant un groupement hydroxyl en position 3a, les phénols planaires et les acides biliaires. Des analyses cinétiques ont révélé qu'UGT2B18 conjugue les 3-hydroxyandrogènes avec une grande efficacité. Des Km de 5.1, 7.8 et 23 mM pour l'androsterone (ADT), l'etiocholanolone et l'androstane-3a, 17b-diol (3a-diol) ont été obtenus respectivement lors d'essais en cellules intactes. L'étude de la distribution tissulaire de UGT2B18 par RT-PCR a montré l'expression de cette enzyme dans le foie, le pancréas, le cervelet, l'intestin et les reins. UGT2B18 est la première UGT isolée chez le singe, dont le substrat stéroïdien principal est l'ADT. Malgré une faible homologie (64 %) avec UGT2B2 (isolée chez le rat), ces deux enzymes conjuguent l'ADT et l'etiocholanolone en position 3a. Chez l'humain, UGT2B17 est active sur l'ADT en position 3a, mais aussi sur la dihydrotestostérone (DHT) en 17b donc, il existe probablement une UGT humaine spécifique pour la conjugaison en position 3a des androgènes.

Contexte

Section :

Endocrinologie

Thème du colloque :

Endocrinologie

Hôte : Université Laval

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