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Clonage et expression du gène de la xylanase de Cryptococcus albidus chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Alain Moreau
Rolf Morosoli
Serge Durand
AM

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Alain Moreau

Résumé du colloque

La xylanase de la levure C. albidus est une enzyme qui dégrade le xylan en xylose et xylobiose. Le gène de la xylanase a été isolé à partir d'une banque génomique de C. albidus chez Escherichia coli en utilisant le cosmide pHC79. Le criblage de la banque a été effectué à l'aide d'une sonde d'ADN de 96 pb représentant une partie du gène de la xylanase. Deux fragments de 6 kb et 10 kb ont été sous-clonés chez S. cerevisiae, au moyen de deux vecteurs navettes: pJD802Y et pVT-8 (obtenu du Dr. Vernet de l'IRB). L'expression du gène cloné est mesurée en mesurant l'activité enzymatique des transformants. Celle-ci est retrouvée exclusivement au niveau de parois cellulaires. Des extraits de la paroi cellulaire ont été analysés sur gel de polyacrylamide suivi d'un "Western blotting". Un polypeptide de 48 kDa, a été détecté par les anticorps anti-xylanase, correspondant à l'enzyme native. Le gène est exprimé à partir de son propre promoteur.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Moncton

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Titre du colloque :

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