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Clonage et expression fonctionnelle de la p44 MAP kinase dans des fibroblastes

Sylvain Meloche
Gilles Pagès
Jacques Poussieguer
SM

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Sylvain Meloche

Résumé du colloque

Les MAP (mitogen-activated protein) kinases sont des sérine/thréonine kinases qui sont rapidement phosphorylées et actives en réponse à tous les facteurs de croissance connus. Ces enzymes pourraient jouer un rôle crucial dans l'intégration et la transmission des signaux responsables de la croissance et de la différenciation cellulaire. Dans le but d'étudier le mécanisme d'activation et le rôle de ces protéines kinases, nous avons isolé un clone d'ADNc codant pour la p44 MAP kinase (p44mapk) et exprimé cet ADNc dans des fibroblastes de hamster. Pour distinguer l'expression du clone d'ADNc de celle de la p44mapk endogène, nous avons fusionné un épitope dérivé de l'hémagglutinine d'influenza (HAP) à l'extrémité 5' de l'ADNc de la p44mapk. L'analyse par Western blot avec un anticorps monoclonal dirigé contre HAP montre que le gène chimérique HAP/p44mapk est exprimé de façon stable dans les cellules fibroblastiques. La protéine chimérique possède une faible activité enzymatique qui est fortement stimulée par les facteurs de croissance comme le sérum, le PDGF et l'o-thrombine. Cette activation s'accompagne de la phosphorylation en tyrosine de la protéine. De plus, nous avons observé que les facteurs de croissance induisent une activation biphasique et soutenue de la protéine kinase chimérique. En conclusion, la construction montre que HAP/p44mapk offre un excellent système pour étudier les relations structure-fonction de cette importante protéine kinase.

Contexte

Section :
Biochimie
news icon Thème du colloque :
Biochimie
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

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