Colloque

Clonage et expression hétérologue de la protéase SAP2 de Candida albicans chez Saccharomyces cerevisiae

Nathalie Dubois

Anna-Rosa Colina

Louis Derepentigny

Pierre Belhumeur

Francine Aumont

Membre a labase

Nathalie Dubois

Résumé du colloque

Candida albicans est un champignon opportuniste qui envahit les organes profonds chez l'hôte immunodéprimé. L'envahissement de la muqueuse gastro-intestinale représente une porte d'entrée importante de la candidose invasive. Les mécanismes de cet envahissement demeurent toutefois inconnus. Les blastoconidies de C. albicans digèrent la mucine, une glycoprotéine de haut poids moléculaire recouvrant la muqueuse intestinale, suite au gavage oral-gastrique de souriceaux. Cette observation a soulevé l'hypothèse que des enzymes mucinolytiques jouent un rôle dans la virulence de C. albicans en facilitant la pénétration de la couche de mucine, étape importante qui précède l'adhérence et l'envahissement des cellules épithéliales. Or C. albicans sécrète plusieurs protéases aspartyles (SAP) dont la SAP2 qui possède cette activité mucinolytique. Afin de démontrer le rôle individuel de la SAP2 comme facteur de virulence, nous avons cherché à exprimer cette protéase chez la levure Saccharomyces cerevisiae, en vue de tester cette souche transformée dans les modèles murins de la candidose oropharyngée et digestive. A cette fin, nous avons cloné (par PCR) le gène de SAP2 à partir de l'ADN génomique (absence d'intron), confirmé la séquence nucléotidique, puis nous l'avons introduit dans un vecteur d'expression de S. cerevisiae en conservant le peptide signal naturel de la SAP2. Par ailleurs, la sécrétion de la SAP2 par S. cerevisiae et son activité mucinolytique ont été vérifiés par Western blotting et par des essais quantitatifs de l'activité mucinolytique. Cette construction est un outil important pour préciser le rôle de la SAP2 comme facteur de virulence chez C. albicans.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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Titre du colloque :

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