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Clonage et séquençage du gène hemB de Bacillus megaterium

Alina Constantin
Jean-Charles Côté
Alexandre Sasarman
Guy Champagne
AC

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Alina Constantin

Résumé du colloque

Bacillus megaterium est une bactérie Gram-positive sporulée, apparentée à Bacillus subtilis. B. megaterium est une bactérie importante du point de vue biotechnologique car elle est utilisée dans la production de la vitamine B12. Les gènes hem sont responsables des premières étapes dans la synthèse de la vitamine B12, ce qui nous a déterminé à les cloner. Nous présentons ci-dessous le résultat du clonage du gène hemB de B. megaterium. En vue du clonage, l'ADN chromosomique de B. megaterium a été digéré avec différentes enzymes de restriction et hybridé (Southern) avec une sonde correspondant au gène hemB de B.subtilis qui a été obtenu par PCR. Des fragments correspondants aux bandes positives ont été séparés sur gradient de sucrose et clonés dans le vecteur pBluescript. Les transformants ont été identifiés par complémentation d'un mutant hemB de E.coli K12. Nous avons identifié 3 clones HemB+ et 4 clones HemB- et utilisé pour des études de restriction et pour le séquençage. Le séquençage a permis de constater une homologie de 91% entre les gènes hemB (B. megaterium) et le gène hemB de B.subtilis et 51.5 % avec le gène hemB de E.coli K12. Étant donné l'importance de B. megaterium dans la biotechnologie, l'instar des gènes hem de B.subtilis, nous proposons un effort massif focalisé sur le clonage des autres gènes hem de cette bactérie.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire
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Thème du colloque :

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