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Clonage partiel d'une nouvelle isoforme du canal calcique alpha1-D à partir du rein de rat

Jingfang Qian
Rémy Sauvé
Jean-François Lucier
Jonathan Ducay
Mélanie Bilodeau
Gérald Bernatchez
Lucie Parent
JQ

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Jingfang Qian

Résumé du colloque

Le rein joue un rôle vital dans l'homéostasie des substrats organiques et des minéraux. Parmi ces derniers, les ions calcium (Ca2+) sont réabsorbés en grande partie à travers la voie paracellulaire au niveau du tubule proximal. Toutefois, la régulation fine de l'entrée de Ca2+ se joue au niveau du tubule distal. La réabsorption de Ca2+ à ce niveau est sous le contrôle hormonal de l'hormone parathyroïde (PTH), la calcitonine et de la vitamine D. La nature des protéines membranaires responsables de la réabsorption calcique dans le tubule distal n'a pas encore été identifiée. Il est connu que l'influx calcique à travers la membrane apicale de ces cellules est sensible aux composés dihydropyridines (DHP), ce qui suggère une homologie fonctionnelle avec les canaux Ca2+ de type-L. Il existe au moins sept gènes homologues codant pour la sous-unité alpha-1 de canaux Ca2+ qui dépendent du potentiel membranaire (S, A, B, C, D, E, G). De tous ces canaux, seulement les canaux alpha-1S, alpha-1C et alpha-1D sont des canaux Ca2+ de type-L tel que confirmé dans notre laboratoire après expression dans des ovocytes de Xenopus laevi. Afin d'élucider la structure primaire du canal Ca2+ présent dans le tubule distal, nous avons conçu une stratégie de clonage par homologie qui consiste à amplifier des fragments d'ADN à partir d'amorces spécifiques pour alpha-1C et alpha-1D. Les ARN totaux, isolés à partir du rein de rat, ont été transcrits par transcription inverse. L'ADNc ainsi obtenu a été amplifié avec les amorces suivantes : (5'-TCACCTTCCAGGAGCAGGGA-3'), et (5'-CGTAGATGAAGAAGAGCATG-3'). Cette réaction d'amplification a généré un fragment unique de 500 bp qui fut alors sous-cloné dans le vecteur pCR2.1-TOPO. L'analyse de la séquence par la méthode de Sanger indique 100% d'homologie avec le fragment RKC6 décrit par le groupe de J. Lytton en 1992. Le fragment RKC6 est identique au domaine IV du canal alpha-1D à l'exception d'une délétion de 29 acides aminés entre IV-S3 et IV-S4. La délétion d'une partie de IVS4 pourrait expliquer le rôle minime que joue le potentiel membranaire dans l'influx calcique des cellules rénales d'origine. Au moment de soumettre ce résumé, nous tentons de compléter le clonage de notre isoforme rénale de alpha-1D de façon à déterminer ses caractéristiques électrophysiologiques après expression dans des ovocytes de Xenope.

Contexte

Section :
Biologie et génétique moléculaires
news icon Thème du colloque :
Biologie et génétique moléculaires
manager icon Responsables :
Rémy Aubin
host icon Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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