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Conditions d'expression du gène de l'intégrase de HIV-1 dans des cellules bactériennes

Khampoune Sayasith
Jocelyn Yelle
Laurent Berthiaume
Gilles Sauvé
KS

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Khampoune Sayasith

Résumé du colloque

La SIDA est une maladie fatale causée par le virus HIV-1. Tôt après sa pénétration dans des cellules cibles, l'ARN viral est copié en ADN qui est par la suite intégré dans le génome cellulaire. L'enzyme responsable de cette intégration est appelée intégrase (IN). Étant donné son rôle essentiel au cours de la réplication virale et l'isolement de mutants incapables d'intégrer un génome dans l'ADN cellulaire et inaptes à produire de nouveaux virus infectieux, cette enzyme occupe une place privilégiée pour le développement de nouveaux agents thérapeutiques. La mise au point de ces inhibiteurs nécessite de grandes quantités d'enzymes, et le premier volet du travail consiste donc à la produire par voie recombinante pour éventuellement évaluer son activité sur un substrat spécifique. Le gène codant pour l'IN de HIV-1 a été cloné dans le plasmide PET-16b et différentes conditions de production de l'enzyme ont été testées dans les bactéries E. coli BL21(DE3)pLysS. Différents paramètres ont été étudiés dont la concentration de l'inducteur (IPTG), le temps et la température de l'induction. L'enzyme est purifiée à l'aide d'une colonne d'affinité, vérifiée par SDS-PAGE et identifiée par une technique de buvardage (Western Blot). Nos résultats confirment que les bactéries constituent un système efficace de production de protéines permettant d'obtenir de bonnes quantités d'enzymes sans avoir à manipuler du matériel infectieux.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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