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Construction de la banque génomique du parasite Toxoplasma gondii et étude de gènes conservés dans l'évolution

Ann Huot
Roger C. Levesque
Alain Tremblay
Françoise Bois-Vert
Gilles Richer
AH

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Ann Huot

Résumé du colloque

Toxoplasma gondii est un sporozoaire responsable d'infections chez l'humain et chez plusieurs espèces animales. Une banque génomique de T. gondii a été construite dans le vecteur phagique lambda 2001. À partir de T. gondii cultivé sur cellules Vero et purifié par gradient de densité, l'ADN chromosomique de T. gondii a été partiellement coupé avec l'endonucléase de restriction Sau3A et les fragments entre 10 kb et 25 kb ont été prélevés. Le vecteur λ2001 a été coupé avec les endonucléases BamHI et EcoRI, lié aux fragments d'ADN de Toxoplasme à l'aide de la T4 DNA ligase, et encapsidé in vitro. La méthode de Clarke et Carbon confirme que les 34000 recombinants, sélectionnés sur une souche hôte, E.coli NM539, équivalent avec une couverture de 99% du génome de T. gondii. Des sondes cellulaires dérivées avec des sondes de gènes conservés chez l'hôte (ADN ribosomal de levure, ADN de souris; fragment PstI de 1,5 kb; triose phosphate isomérase (ADN de fragment NcoI de 1,8 kb) et ADN ribosomal de Toxoplasme). Les phages recombinants positifs seront isolés, purifiés, et la structure des gènes, analysée et comparée à celle d'organismes apparentés Plasmodium et Schistosoma.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université d’Ottawa

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