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Construction d'une banque génomique de Pseudomonas maltohphilia dans λZ001 et l'isolement d'un gène β-lactamase à l'aide d'oligonucléotides

Julien Dufresne
Roger C. Levesque
Guy Vezina
JD

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Julien Dufresne

Résumé du colloque

Pseudomonas maltohphilia est l'une des seules espèces bactériennes résistante à l'imipenem (N, N-formimidyl thienamycine). Nous remarquons une activité enzymatique de 2 β-Lactamases (L-1 et L-2) induites et chromosomiques. Afin d'isoler le(s) gène(s) impliqué(s) dans ce mécanisme de résistance et d'étudier la régulation génétique, nous avons construit une banque génomique de P. maltohphilia dans le vecteur phagique λZ001. L'avantage de ce vecteur, c'est la présence de plusieurs sites de clonage. La croissance des phages sur une souche de E. coli P2 lysogène permet la sélection des recombinants (phénotype Spi-). Les fragments d'ADN chromosomique de 15 à 25 kb, obtenus par une digestion partielle avec l'endonucléase de restriction Sau3A ont été clonés aux sites BamHI du vecteur λZ001. La banque a été criblée par hybridation moléculaire en utilisant comme sonde un mélange d'oligonucléotides. Ce mélange contient des 17-mères correspondant aux 32 possibilités de séquences nucléotidiques codant pour la partie N-terminale de la β-lactamase L-1. Un clone positif a été identifié et la caractérisation de l'opéron β-lactamase est en voie de réalisation.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Montréal

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Titre du colloque :

Biologie moléculaire
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