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Résumé du colloque
Afin d'établir un protocole de régénération in vitro chez le Pin gris à partir de graines, deux systèmes de régénération adventive ont été mis au point: l'organogenèse directe à partir des embryons et l'organogenèse à partir de nodules méristématiques. Le premier système a été testé sur 5 familles supérieures et 5 inférieures (Briand et al. 1998). Le pourcentage d'embryons formant des bourgeons était significativement plus élevé chez les familles supérieures (82.0%) que chez les inférieures (49.5%) et sur une base familiale, le taux de germination était positivement corrélé avec la plupart des paramètres de la réactivité in vitro. Le système de nodules méristématiques, pour sa part, implique la formation de nodules à partir d'embryons mis en culture en milieu liquide, et la multiplication et différenciation subséquente des nodules sur membranes de polypropylène. Le pourcentage d'embryons qui verdissent, le taux d'induction de nodules et leur patron de développement sont influencés par le traitement d'imbibition des graines avant le prélèvement des embryons zygotiques, la lumière ainsi que la forme et la quantité d'azote dans le milieu. Nous avons, parallèlement, déterminé par cytométrie en flux les quantités absolue et relative (cycle cellulaire) d'ADN par noyau chez des embryons de Pin gris prélevés de graines sèches ou en imbibition (Wyman et al. 1996, 1997). Des analyses réalisées sur 22 familles demi-fratries ont mis en évidence que la quantité moyenne d'ADN nucléaire est significativement plus faible chez les embryons de familles supérieures comparativement à ceux issus de familles inférieures. Chez des embryons de cinq de ces familles, il a été a démontré que le pourcentage de noyaux dans les différentes phases du cycle cellulaire normal (2C-4C) ou >4C change au cours de la période d'imbibition des graines (Wyman et al. 1996). Nos travaux en cours visent à étudier la relation entre les caractéristiques cellulaires des embryons et leur réactivité in vitro.
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