Colloque

Culture de protoplastes chez le Mélèze hybride (Larix x eurolepis Henry) à partir de matériel âgé

Qing Yang

Sylvie Laliberté

Membre a labase

Qing Yang

Résumé du colloque

Des protoplastes ont été isolés à partir d'aiguilles de tiges âgées in vitro, multipliées sur un milieu avec addition de 1x10^6 M d'AIB (acide indolebutyrique) et 5x10^6 M de BAP (6-benzylaminopurine). Ce système organogène provenant de bourgeons de rameaux courts prélevés sur des boutures d'un arbre de 8 ans. Le meilleur rendement (2.2 x 10^7 protoplastes/g de matériel frais) et le pourcentage le plus élevé de viabilité (84.3%) ont été obtenus après digestion des aiguilles dans un mélange enzymatique contenant 0.5% de Cellulase R-10, 0.5% de Macérozyme R-10 et 0.5% d'albumine bovine (ASB). Le diamètre des protoplastes est très hétérogène et variant entre 10 et 54 µm. Les premières divisions ont été observées après deux jours de culture, dans un milieu de Murashige et Skoog modifié (MSG) renfermant 2 mg/l de 2,4-D (acide 2,4-dichlorophénoxyacétique) et 0.5 mg/l de BAP. Après une semaine de culture, 15 à 20% des protoplastes s'étaient divisés, certains produisant des microcolonies. La fréquence de division des protoplastes variant en fonction de leur dimension. La prolifération d'endophytes bactériens à l'intérieur des cellules a empêché le développement subséquent des microcolonies.