Communication

Détection de cellules tumorales d'origine épithéliale dans le sang périphérique par RT-PCR

Isabelle Matte

Marie-Anne Quesnel

Pierre Douville

Valérie Roger

Nancy Rutherford

Nancy Bisson

Sandra Belley

Membre a labase

Isabelle Matte

Résumé de la communication

La majorité des cancers chez l'humain sont des carcinomes dérivant de cellules épithéliales qui expriment des kératines. OBJECTIF : Développer une méthode applicable en clinique de détection par RT-PCR des cellules néoplasiques circulantes dans le sang basée sur l'expression de la kératine 19. La méthode doit être capable de détecter quelques dizaines de cellules parmi environ 15 millions de leucocytes. MÉTHODE : Nous avons opté pour une préparation des spécimens à partir de 3ml de sang prélevé avec EDTA. Après lyse des érythrocytes, le culot leucocytaire est traité au TRIZOL pour en extraire l'ARN total. La transcription inverse est réalisée avec l'oligodT suivie d'un PCR de 30 à 40 cycles. Les produits de PCR sont ensuite visualisés sur des gels contenant du bromure d'éthidium. Les conditions de PCR furent optimisées pour plusieurs paires d'amorces produisant des brins de 148 à 400 paires de base à partir de cellules d'un carcinome humain en culture (clone HT29). RÉSULTATS : La sélection des amorces est compliquée par la présence d'un pseudo-gène dans le génome et la longeur restreinte de plusieurs introns. Certains couples ont amplifié de l'adn génomique (provenant des leucocytes) contaminant l'arn extrait et possiblement amplifié le pseudo-gène. Cependant, nous avons pu identifier un couple prometteur produisant une bande spécifique de 264pb avec une sensibilité équivalente à 10 cellules par ml, soit environ 2 cellules par million de leucocytes. CONCLUSION : Il est possible de détecter quelques cellules épithéliales avec un pcr simple parmi des millions de leucocytes par l'expression différentiée de la kératine 19.

Contexte

Section :

Cancérologie

Domaine de la communication :

Cancérologie

Hôte : Université du Québec à Montréal

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Thème du communication :

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