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Détection de l'activité poly(ADP-ribose) glycohydrolase sur SDS-PAGE

GB

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Gino Brochu

Résumé du colloque

Dans les cellules eucaryotiques, la poly(ADP-ribosylation) est une importante modification post-traductionnelle covalente qui joue un rôle dans les phénomènes cellulaires tels que la transformation cellulaire, la transcription, la réparation et la réplication. Deux enzymes nucléaires sont impliquées dans le métabolisme du poly(ADP-ribose): soit la poly(ADP-ribose) polymérase qui le synthétise et la glycohydrolase qui le dégrade. Cette dernière hydrolyse le lien ribose-ribose et libère ainsi des résidus d'ADP-ribose. Nous avons mis au point une technique de détection de la poly(ADP-ribose) glycohydrolase afin d'étudier son rôle aux niveaux cellulaire et moléculaire. Après séparation sur SDS-PAGE contenant du poly(ADP-ribose) posé sur des gels de renaturation, l'enzyme a été renaturée après lavages successifs pour enlever le SDS, et incubée dans un tampon de renaturation. L'enzyme apparaît comme une bande claire sur fond sombre après incubation avec de l'ADP-ribose [32P] noyé hydrosol. L'effet combiné de l'omission de l'enzyme dans le gel et la présence de substrat semblent favoriser sa renaturation.

Contexte

news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Rimouski

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Titre du colloque :

Biochimie, biologie moléculaire

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