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Détection et analyse de l'ADN cellulaire résiduel dans le vaccin polioïmyélite

Josée Flynn
Christian Hours
JF

Membre a labase

Josée Flynn

Résumé du colloque

Afin d'obtenir de meilleurs rendements lors de la production du vaccin polio, les poliovirus peuvent être produits sur cellules Vero. Cependant, ces cellules transformées présentent un risque biologique (tumorigénicité). Aussi, par prudence, les autorités responsables demandent entre autre que le vaccin fini ne contienne pas plus que 10 pg d'ADN cellulaire par ml. Afin de répondre à cette norme, nous avons développé une méthode d'hybridation moléculaire qui nous permet de détecter 10 pg. Pour ce faire, différents paramètres ont été établis afin de définir les conditions optimales d'hybridation: T° - concentration en formamide, force ionique, temps de renaturation, sondes d'ADN de type, de longueur et de spécificité différents, supports différents. A ce jour, nous avons 10 pg d'ADN sur une base régulière en respectant les conditions suivantes: 42°C, 30-50% formamide, 2-6 X SSC, sonde d'ADN total xénique marquée à activité spécifique de 2 à 3 x 10^7 cpm/µg, sur support de nitrocellulose. Ultérieurement, nous cherchons à améliorer la sensibilité de la technique. Nous allons analyser d'autre part l'ADN cellulaire à l'aide de différentes sondes spécifiques et éprouver la possibilité que les poliovirus soient des vecteurs de séquences d'ADN cellulaires.

Contexte

Section :
Microbiologie, virologie et immunologie
news icon Thème du colloque :
Microbiologie, virologie et immunologie
host icon Hôte : Université d’Ottawa

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Titre du colloque :

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