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Détection et quantification du poly(ADP-ribose) synthétisé in vitro et in vivo par les techniques de dot-immunoblot et d'ELISA

El Bachir Affar
Sylvie Bourassa
Guy G. Poirier
Rashmi G. Shah
Patrick J. Duriez
EB

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El Bachir Affar

Résumé du colloque

La poly(ADP-ribose) polymérase (PARP) se fixe sur les cassures de l'ADN et catalyse la formation du poly(ADP-ribose) à partir du NAD. Cette enzyme est impliquée dans la transduction des signaux causés par les bris de l'ADN et par conséquent dans des processus cellulaires comme la réparation de l'ADN et l'apoptose. Les méthodes généralement utilisées pour déterminer les niveaux de poly(ADP-ribose) consistent en sa purification et sa digestion enzymatique suivie de la mesure des nucléosides résultants par HPLC. Ces méthodes, bien que précises et reproductibles, sont relativement longues. Dans ce travail nous avons mis au point deux procédures immunologiques permettant de déterminer les niveaux du poly(ADP-ribose). La technique du dot-blot et la procédure d'ELISA. Dans les deux cas, la détection est faite à l'aide d'anticorps dirigés contre le polymère suivie par un deuxième anticorps couplé à la peroxidase qui sera révélé par un substrat luminescent pour le dot-blot ou par colorimétrie pour l'ELISA. Ces méthodes permettent d'éviter l'utilisation de la radioactivité, d'obtenir une grande sensibilité de détection de l'ordre du femtomolaire et sont applicables au poly(ADP-ribose) purifié in vitro ainsi que celui dérivé de cellules en culture traitées avec des agents endommageant l'ADN.

Contexte

Section :
Biochimie et biologie structurale
news icon Thème du colloque :
Biochimie et biologie structurale
manager icon Responsables :
Michel Guertin
host icon Hôte : Université Laval

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Titre du colloque :

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