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Détermination des propriétés cinétiques de nouvelles NO synthases de bactéries

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François Chartier

Résumé de la communication

Les oxydes nitriques synthases (NOS) ont pour fonction la synthèse de l’oxyde nitrique (NO) qui sert de molécule de stress et de signal chez l’humain et les animaux. Le NO est synthétisé à partir du L-arginine par deux réactions successives d’hydroxylation. Ces réactions sont catalysées au site actif des NOS qui est composé d’un hème coordonné à un résidu cystéine. Récemment, des gènes codant potentiellement pour des NOS ont été découverts chez des bactéries à Gram positif. Nous avons débuté la caractérisation d’une NOS bactérienne pour démontrer que cette protéine peut synthétiser le NO et pour déterminer les propriétés enzymatiques de la protéine par rapport aux NOS des mammifères. La NOS de Staphylococcus aureus a été produite chez Escherichia coli en fusion avec des résidus histidines. Nous montrons qu’une grande proportion de l’enzyme est retrouvée dans la fraction soluble d’extraits cellulaires et peut donc être purifiée en condition native sur une colonne contenant du nickel. Nos résultats montrent que la protéine, telle que purifiée, contient un hème à l’état oxydé dont le spectre optique est similaire à celui des NOS de mammifères. Nous avons utilisé un appareil de type stopped-flow afin de déterminer les cinétiques de réaction en présence des substrats L-arginine et N-hydroxy-L-arginine. Les similarités et différences observées par rapport aux NOS de mammifères seront présentées et discutées.

Contexte

news icon Domaine de la communication :
Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire
host icon Hôte : Université Laval

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Biochimie, biologies cellulaire et moléculaire