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Développement du «FPLC»: rapidité, qualité et économie

Ying Mao
Bing Li
Sheng-Xiang Lin
YM

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Ying Mao

Résumé du colloque

La chromatographie par FPLC, en plus d'être rapide, présente les avantages de qualité et d'économie. Nous avons utilisé la caractéristique de l'élution rapide sur gel de Sépharose afin d'élaborer une nouvelle méthode permettant la réduction des étapes de purification. Le Sépharose, ainsi que les gels similaires (Q-Sépharose, Blue-Sépharose, et phenyl-Sépharose etc.), permettent une élution rapide, une bonne résolution et de bons rendements. Premièrement, les échantillons ont été directement déposés sur la colonne, éliminant ainsi l'étape de la dialyse. Deuxièmement, une faible concentration de sel a été utilisée lors du dépôt de grands volumes d'échantillons entraînant ainsi une réduction de la pression sur l'envers de la colonne. Troisièmement, nous avons utilisé la programmation cyclique, permettant ainsi de changer de grands volumes d'échantillons, ce qui a aidé le "superloop" de 10 ml. La chromatographie par FPLC a consommé en moyenne quelques heures. L'élaboration de la méthode de FPLC a permis d'obtenir une préparation de protéines avec un haut degré de pureté, cependant, d'atteindre une efficacité spécifique beaucoup plus élevée que celle obtenue avec les méthodes conventionnelles probablement due à l'élimination de l'étape partielle. Le rendement a été augmenté pour l'obtention de purification de la 17β-HSD et de l'RNA synthétase supportée sur environ trois jours et huit heures, respectivement. Nous avons utilisé cette méthode dans le but d'obtenir des cristaux de 17β-HSD ayant une bonne résolution lors de la diffraction aux rayons-X.

Contexte

Section :
Biochimie, biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biochimie, biologie moléculaire
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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Thème du colloque :

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