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Développement d’un modèle d’expression inductible dans des hybridomes de lymphocytes B

Dominique Tardif
Réal Lemieux
DT

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Dominique Tardif

Résumé du colloque

L’étude des gènes modulant la prolifération des hybridomes de lymphocytes B revêt un intérêt biotechnologique important dû à leur utilisation dans la production d’anticorps monoclonaux. Le but de ce travail était de développer un modèle d’expression permettant la construction endogène d’ARN anti-sens sous contrôle d’un inducteur externe. Nous avons utilisé un vecteur d’expression (pMSG-CAT) portant le gène rapporteur CAT (Chloramphenicol Acetyl Transférase) sous le contrôle du promoteur MMTV-LTR (Mouse Mammary Tumor Virus), inductible via des glucocorticoïdes. Nous avons transfecté pMSG-CAT par Électroporations dans une lignée d’hybridomes et nous avons obtenu un transfectant stable dont l’activité CAT s’est avérée inductible par le dexaméthasone (1 uM). En fait le niveau basal d’activité CAT dans ce transfectant était de 2.1 pmoles/h/ug de protéine et était augmenté à 20 pmoles/h/ug de protéine après une induction de 24 heures (stimulation de 10x). Nous possédons donc un outil permettant de surproduire de l’ARN antisens via un inducteur externe. Ceci nous permettra l’étude de l’implication de certains gènes dans la prolifération de ce type de cellules et mènera éventuellement à l’obtention d’hybridomes à prolifération contrôlable.

Contexte

Section :
Biologie moléculaire
news icon Thème du colloque :
Biologie moléculaire
host icon Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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