Colloque

Développement d'un nouveau vecteur navette pour E. coli et S. lividans utile en mutagénèse dirigée

Alain Moreau

Dieter Klueppel

François Shareck

François Paradis

Rolf Morosoli

Membre a labase

Alain Moreau

Résumé du colloque

Il n'existe pas de technique de mutagénèse dirigée applicable directement aux streptomycètes. Afin de réaliser ces expériences, il faut avoir cloné le gène d'abord chez E. coli avec un vecteur approprié puis après avoir effectué la mutagénèse, il faut recolier le fragment muté dans un vecteur de streptomycète pour évaluer les effets des mutations introduites. Pour éviter les travaux de sous-clonage, un vecteur navette a été construit. Ce vecteur pFZ12 (6.7 Kb) se compose du phagemid pFZ19 (2.8 Kb) qui se réplique chez E. coli, qui produit le phage filamenteux et qui peut porter une simple brin en utilisant le phage helper M13K07, et du fragment XmnI BclI (3.3 Kb) provenant du plasmide pIJ702, qui contient une origine de réplication pour cet hôte. Ce vecteur a été introduit dans ce vecteur au niveau de la capacité de clonage permettant l'acceptance de site BamHI. Ce vecteur a été établi stable dans les deux souches et ne subit de délétion dans S. lividans. Pour vérifier l'efficacité de ce vecteur, nous avons fait, à titre d'exemple, une mutation ponctuelle dans le gène de la xylanase de S. lividans. L'expression de ce gène ont été effectuées.

Contexte

Section :

Biologie des actinomycètes

Thème du colloque :

Biologie des actinomycètes

Hôte : Université de Sherbrooke

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Titre du colloque :

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