Colloque

Développement d'un substrat permettant d'évaluer l'activité d'intégration de l'enzyme intégrase du VIH-1

Jeannot Lettre

Khampoune Sayasith

Jocelyn Yelle

Membre a labase

Jeannot Lettre

Résumé du colloque

La synthèse d'inhibiteurs efficaces de l'intégrase du VIH-1, le virus du SIDA, nécessite un test d'activité performant pour identifier les meilleures molécules inhibitrices. La plupart des tests actuels mesurent seulement l'activité endonucléase de l'enzyme, alors que des inhibiteurs potentiels pourraient en principe bloquer l'activité enzymatique d'intégration. Un test permettant d'évaluer quantitativement l'activité d'intégration de l'enzyme serait donc d'une grande utilité mais il n'en existe aucun qui soit vraiment satisfaisant. Nous avons construit un substrat pour un tel test à partir du gène de sélection pour l'antibiotique zéocine (InVitrogen) modifié pour porter à ses deux extrémités une séquence nucléotidique reconnue par l'intégrase du VIH-1. Environ 40 nucléotides correspondant à chacune des deux extrémités U3 et U5 du LTR du VIH-1 ont été ajoutés de part et d'autre du gène de résistance à la zéocine et le fragment d'ADN résultant a été cloné au site Xba I du plasmide pT7T3a18. Le substrat de l'intégrase peut alors être obtenu en excisant l'insert du plasmide par digestion avec Sca I. Les différentes étapes de la stratégie utilisée pour construire le substrat enzymatique seront présentées plus en détails. Ce système sera d'une grande utilité pour l'évaluation d'inhibiteurs de l'intégrase synthétisés dans notre laboratoire.

Contexte

Section :

Biologie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biologie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université McGill

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