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Développement d'une sonde moléculaire à partir du gène de la D-hydantoinase de Pseudomonas putida DSM 84 et son utilisation comme outil de détection

Stéphane Viau
Gisèle Lapointe
André Morin
Danielle Leblanc
SV

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Stéphane Viau

Résumé du colloque

Les D-hydantoinases microbiennes ont un haut potentiel dans la production industrielle des acides aminés par biocatalyse. Dans ce contexte, la recherche et l'isolement de nouveaux microorganismes producteurs de l'enzyme D-hydantoinase est nécessaire. Afin de détecter rapidement de tels organismes, une sonde moléculaire non radioactive a été construite et utilisée de façon à identifier des organismes possédant des gènes codant pour la D-hydantoinase. Un fragment d'ADN issu de Pseudomonas putida DSM 84 contenant le gène codant pour la D-hydantoinase a été cloné puis réduit davantage par des sous-clonages jusqu'à l'isolement d'un fragment de 1.5 kb. Celui-ci a été marqué et utilisé comme sonde dans des hybridations d'ADN génomique à l'échelle d'environ 35 microorganismes positifs ou négatifs à l'activité D-hydantoinase, de même qu'avec l'ADN de bactéries de groupe A et l'ARNr des Pseudomonadaceae ou d'autres végétales. Dans les conditions d'hybridation utilisées, la sonde reconnaît des séquences homologues d'ADN des bactéries du groupe B et l'ARNr des Pseudomonadaceae et exprime l'activité D-hydantoinase. Aussi, la sonde a été appliquée à l'ARN d'un mélange complexe de microorganismes, mais pas à l'ADN de bactéries isolées de tels mélanges, et des séquences homologues avec le gène de la D-hydantoinase de P. putida DSM 84 ont été reconnues. Ces résultats indiquent que la sonde, si identifiée comme étant des Pseudomonas du groupe B, est marquée. Cette sonde est donc un outil très utile dans la détection de nouveaux membres du groupe I de l'ARNr produisant la D-hydantoinase.

Contexte

Section :
Biotechnologie
news icon Thème du colloque :
Biotechnologie
host icon Hôte : Université du Québec à Montréal

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Titre du colloque :

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