Colloque

Développement d'une stratégie pour introduire des mutations dans le RNA ribosomique d'Escherichia coli

Chantal Paradis

Guy Boileau

Lea Brakier-Gingras

Membre a labase

Chantal Paradis

Résumé du colloque

Plusieurs indices suggèrent que le RNA ribosomique joue un rôle prépondérant dans le fonctionnement du ribosome bactérien. Pour le préciser mieux, il serait important de pouvoir sélectionner des ribosomes ribosomiques bactériens où la séquence du RNA est modifiée. Toutefois, la redondance des gènes codant pour le RNA ribosomique ne permet pas de recourir à la mutagénèse classique pour obtenir de tels mutants. Nous avons développé une stratégie basée sur les méthodes de génétique pour obtenir des mutants où le RNA est modifié. Notre approche comprend les étapes suivantes: (a) synthèse d'un cDNA par copie du RNA ribosomique, 16S ou 23S; (b) mutagénèse de ces sites choisis de ce cDNA à l'aide d'un vecteur approprié M13 mp18; (c) insertion du cDNA muté dans un système à transcription SP6 et synthèse in vitro du RNA ribosomique; (d) reconstitution de sous-unités ribosomiques 30S et 50S, contenant le RNA muté. L'application de ce procédé à l'introduction de mutations dans le RNA 16S est présentée. Avec ce procédé, qui permet l'obtention de ribosomes où le RNA est modifié sélectivement, il sera possible de préciser les domaines du RNA impliqués dans les différentes étapes de la synthèse protéique.

Contexte

Section :

Biochimie cellulaire et moléculaire

Thème du colloque :

Biochimie cellulaire et moléculaire

Hôte : Université du Québec à Chicoutimi

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Titre du colloque :

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